Cumu determinà a cuncentrazione ottimali?
Per l'inductor IPTG (isopropyl-beta-d-thiogalactoside), più altu hè a cuncentrazione, u megliu.A cuncentrazione ottimali dipende di e cundizioni spirimintali specifiche è l'effettu d'induzione desideratu.
In generale, a cuncentrazione di IPTG hè aduprata in a gamma di 0,1-1 mM.Cuncentrazioni più bassu ponu riduce l'effetti avversi nantu à a crescita di e cellule è ponu riduce a citotossicità per l'espressione di e proteine di destinazione.Cuncentrazioni più elevate ponu causà una carica metabolica eccessiva di e cellule, affettendu a crescita cellulare è l'efficienza di espressione.
A manera di determinà a cuncentrazione ottimale pò esse di valutà u livellu di espressione di a proteina di destinazione cunducendu teste di induzione IPTG à diverse cuncentrazioni.I testi di cultura à piccula scala ponu esse realizati utilizendu una gamma di concentrazioni IPTG (per esempiu, 0,1 mM, 0,5 mM, 1 mM, etc.) è l'effettu di l'espressione à diverse cuncentrazioni pò esse evaluatu detectendu u livellu di espressione di a proteina di destinazione (per esempiu, Western. rilevazione di macchia o fluorescenza).Sicondu i risultati sperimentali, a cuncentrazione cù u megliu effettu di espressione hè stata scelta cum'è a cuncentrazione ottima.
Inoltre, pudete ancu riferite à a literatura pertinente o à l'esperienza di altri laboratorii per capiscenu a gamma di cuncentrazione IPTG cumunimenti utilizata in cundizioni sperimentali simili, è dopu ottimisate è aghjustate secondu e bisogni sperimentali.
Hè impurtante à nutà chì a cuncentrazione ottimali pò varià secondu diversi sistemi di espressione, proteine di destinazione, è cundizioni sperimentali, per quessa, hè megliu ottimisà in casu per casu.
Tempu di Postu: 28-Sep-2023