Dithiothreitol (DTT) hè un agenti riducente cumunimenti usatu, cunnisciutu ancu com'è u novu additivu verde.Hè un picculu compostu organicu moleculare cù dui gruppi mercaptani (-SH).A causa di e so proprietà di riduzzione è a stabilità, a DTT hè largamente usata in esperimenti di biochimica è biologia moleculare.
U rolu principali di DTT hè di riduce i ligami disulfuri in proteine è altre biomolecule.U ligame disulfuru hè una parte impurtante di u plegamentu di a proteina è a stabilità, ma in certi cundizioni sperimentali, cum'è l'analisi SDS-PAGE riducibile, a ricombinazione di a proteina è u plegamentu, hè necessariu di riduce u ligame disulfuru à dui gruppi tioli per unravel a struttura spaziale di a proteina.DTT pò reagisce cù ligami disulfide per riduce à i gruppi mercaptani, aprendu cusì a struttura spaziale di a proteina è facenu fàciule per analizà è manipule.
DTT pò ancu esse usatu per prutege l'attività di l'enzima è a stabilità.In certi reazzioni catalizzati da l'enzima, l'attività di l'enzima pò esse ridutta da l'oxidante.DTT pò reagisce cù l'oxidanti per riduzzione à sustanzi innocu, prutegge cusì l'attività è a stabilità di l'enzima.
Comparatu à l'agenti riducenti tradiziunali, cum'è β-mercaptoethanol (β-ME), DTT hè cunsideratu cum'è un agenti riducente più sicuru è più stabile.Ùn hè micca solu stabile in suluzione aquosa, ma ancu mantene e so proprietà riduzzione in cundizioni d'alta temperatura è acidu-base.
L'usu di DTT hè relativamente simplice.In generale, a DTT hè dissoluta in un buffer appropritatu è dopu aghjunghje à u sistema sperimentale.A cuncintrazione ottima di DTT deve esse determinata secondu l'esperimentu specificu, è hè generalmente utilizatu in a gamma di 0.1-1mM.Cuncentrazioni più bassu ponu riduce l'effetti avversi nantu à a crescita di e cellule è ponu riduce a citotossicità per l'espressione di e proteine di destinazione.Cuncentrazioni più elevate ponu causà una carica metabolica eccessiva di e cellule, affettendu a crescita cellulare è l'efficienza di espressione.
A manera di determinà a cuncentrazione ottimale pò esse di valutà u livellu di espressione di a proteina di destinazione cunducendu teste di induzione IPTG à diverse cuncentrazioni.I testi di cultura à piccula scala ponu esse realizati utilizendu una gamma di concentrazioni IPTG (per esempiu, 0,1 mM, 0,5 mM, 1 mM, etc.) è l'effettu di l'espressione à diverse cuncentrazioni pò esse evaluatu detectendu u livellu di espressione di a proteina di destinazione (per esempiu, Western. rilevazione di macchia o fluorescenza).Sicondu i risultati sperimentali, a cuncentrazione cù u megliu effettu di espressione hè stata scelta cum'è a cuncentrazione ottima.
Inoltre, pudete ancu riferite à a literatura pertinente o à l'esperienza di altri laboratorii per capiscenu a gamma di cuncentrazione IPTG cumunimenti utilizata in cundizioni sperimentali simili, è dopu ottimisate è aghjustate secondu e bisogni sperimentali.
Hè impurtante à nutà chì a cuncentrazione ottimali pò varià secondu diversi sistemi di espressione, proteine di destinazione, è cundizioni sperimentali, per quessa, hè megliu ottimisà in casu per casu.
In riassuntu, DTT hè un agentu riduzzione cumunimenti utilizatu chì pò esse usatu per riduce i ligami disulfuri in proteine è altre biomolecule è per prutege l'attività è a stabilità enzimatica.Hè stata largamente utilizata in esperimenti di biochimica è biologia moleculare.
Tempu di Postu: 28-Sep-2023