U ditiotreitolo (DTT) hè un agente riduttore cumunemente adupratu, cunnisciutu ancu cum'è u novu additivu verde. Hè un picculu cumpostu organicu moleculare cù dui gruppi mercaptani (-SH). Per via di e so proprietà riduttive è di a so stabilità, u DTT hè largamente adupratu in esperimenti di biochimica è di biologia moleculare.
U rollu principale di u DTT hè di riduce i ligami disulfuru in e proteine è altre biomolecule. U ligame disulfuru hè una parte impurtante di u plegamentu è di a stabilità di e proteine, ma sottu certe cundizioni sperimentali, cum'è l'analisi SDS-PAGE riducibile, a ricombinazione è u plegamentu di e proteine, hè necessariu riduce u ligame disulfuru à dui gruppi tioli per svelà a struttura spaziale di a proteina. U DTT pò reagisce cù i ligami disulfuru per riduce li à gruppi mercaptani, aprendu cusì a struttura spaziale di a proteina è rendendula faciule da analizà è manipulà.
U DTT pò ancu esse adupratu per prutege l'attività è a stabilità di l'enzima. In certe reazzioni catalizate da enzimi, l'attività di l'enzima pò esse ridutta da l'ossidante. U DTT pò reagisce cù l'ossidanti per riduce li à sustanzi innocui, pruteggendu cusì l'attività è a stabilità di l'enzima.
In paragone cù l'agenti riduttori tradiziunali cum'è u β-mercaptoetanolu (β-ME), u DTT hè cunsideratu cum'è un agente riduttore più sicuru è più stabile. Ùn hè micca solu stabile in suluzione acquosa, ma mantene ancu e so proprietà riduttori à alta temperatura è in cundizioni acido-basiche.
L'usu di DTT hè relativamente simplice. In generale, DTT hè dissoltu in un buffer adattatu è dopu aghjuntu à u sistema sperimentale. A cuncentrazione ottima di DTT deve esse determinata secondu l'esperimentu specificu, è hè generalmente aduprata in l'intervallu di 0,1-1 mM. Cuncentrazioni più basse ponu riduce l'effetti avversi nantu à a crescita cellulare è ponu riduce a citotossicità per via di a sovraespressione di e proteine bersagliu. Cuncentrazioni più alte ponu causà un eccessivu caricu metabolicu cellulare, affettendu a crescita cellulare è l'efficienza di l'espressione.
U modu per determinà a cuncentrazione ottima pò esse di valutà u livellu d'espressione di a proteina bersagliu cunducendu testi d'induzione IPTG à diverse cuncentrazioni. I testi di cultura à piccula scala ponu esse realizati aduprendu una gamma di cuncentrazioni IPTG (per esempiu 0,1 mM, 0,5 mM, 1 mM, ecc.) è l'effettu d'espressione à diverse cuncentrazioni pò esse valutatu rilevendu u livellu d'espressione di a proteina bersagliu (per esempiu Western blot o rilevazione di fluorescenza). Sicondu i risultati sperimentali, a cuncentrazione cù u megliu effettu d'espressione hè stata scelta cum'è a cuncentrazione ottima.
Inoltre, pudete ancu riferisce à a literatura pertinente o à l'esperienza di altri laboratori per capisce a gamma di concentrazione IPTG cumunemente aduprata in cundizioni sperimentali simili, è dopu ottimizà è aghjustà secondu i bisogni sperimentali.
Hè impurtante nutà chì a cuncentrazione ottima pò varià secondu i diversi sistemi d'espressione, e proteine bersagli è e cundizioni sperimentali, dunque hè megliu ottimizà casu per casu.
In riassuntu, u DTT hè un agente riduttore cumunemente adupratu chì pò esse adupratu per riduce i ligami disulfuru in e proteine è altre biomolecule è per prutege l'attività è a stabilità di l'enzimi. Hè statu largamente adupratu in esperimenti di biochimica è di biologia moleculare.
Data di publicazione: 28 di settembre di u 2023