Ci sò parechji eroi unsung intornu à noi, chì parenu esse ordinariu, ma in fattu cuntribuiscenu in silenziu assai per noi.Proteinase K hè u "eroe unsung" in l'industria di diagnostichi moleculari, ancu s'è paragunatu cù u "grande è putente" in l'industria, a proteinase K hè cusì bassa chì avemu longu trascuratu a so impurtanza.Cù u scoppiu di a nova epidemia di a corona, a dumanda di proteinasi K hè cresciuta, è l'offerta in casa è in l'esteru hè luntanu da u cunsumu, è ognunu hà capitu di colpu chì a proteinase K hè cusì impurtante.
Chì ghjè l'usu di proteinase K?
A Proteinase K hè una serina proteasi cù l'attività di l'enzima proteolitica è pò mantene l'attività in una larga gamma di ambienti (pH (4-12,5), buffer d'alta sal, alta temperatura di 70 ° C, etc.).Inoltre, l'attività di proteinase K ùn hè micca impedita da SDS, urea, EDTA, guanidine hydrochloride, guanidine isothiocyanate, etc., è una certa quantità di detergente pò ancu rinfurzà l'attività di proteinase K. In trattamentu medico (virus è disinfezione microbiana). ), l'alimentu (tenerizazione di a carne), a pelle (amalgamazione di i capelli), a vinificazione (clarificazione di l'alcohol), a preparazione di l'aminoacidu (piuma degradata), l'estrazione di l'acidu nucleicu, l'ibridazione in situ, etc., proteinase K Ci sò applicazioni.L'applicazione più cumuna hè l'estrazione di l'acidu nucleicu.
Proteinase K pò enzymolyze ogni tipu di prutezione in u sample, cumpresi quelli histones chì sò strettamente ligati à l'acidi nucleici, cusì chì l'acidi nucleici ponu esse liberati da a mostra è liberati in l'estrattu, facilitendu u prossimu passu di l'estrazione è a purificazione.In a rilevazione di l'acidu nucleicu virali, a proteinasi K hè unu di i cumpunenti impurtanti in a suluzione di campionamentu di virus.Proteinase K pò cracke è inattivà a proteina di u mantellu di u virus, chì hè più sicura durante a fase di trasportu è di deteczione;in più, a proteinase K pò ancu degradate a RNase impedisce a degradazione di l'RNA virali è facilita a deteczione di l'acidu nucleicu.
A fama notturna di proteinase K
Sia in u campu di a ricerca scientifica o in u campu di l'IVD, l'estrazione di l'acidu nucleicu hè l'esperimentu più basicu, cusì a proteinase K hè sempre stata una esistenza assai impurtante.Tuttavia, in u passatu, a proteinase K era assai menu cunnisciuta da u so rolu.Una grande parte di questu era perchè a relazione di offerta è dumanda di proteinase K era assai stabile.Pochi persone pensanu chì l'offerta di proteinase K seria un prublema.
Cù u scoppiu di a nova epidemia di a corona, a dumanda di teste di l'acidu nucleicu hè aumentata.A fine di ghjugnu 2020, a Cina hà finitu quasi 90 milioni di novi teste di corona, è questu numeru hè ancu più allarmante à scala glubale.In esperimenti di estrazione di l'acidu nucleicu, a cuncentrazione di travagliu di proteinase K hè di circa 50-200 μg/mL.In generale, ci vole circa 100 μg di proteinasi K per estrae una mostra di l'acidu nucleicu.In l'usu attuale, per aumentà l'efficienza di l'estrazione di l'acidu nucleicu, spessu a Proteinase K serà usata in una quantità aumentata.A rilevazione di l'acidu nucleicu di u novu coronavirus hà purtatu una grande quantità di dumanda di proteinasi K.L'equilibriu originale di l'offerta è a dumanda di proteinase K hè stata rapidamente rottu, è a proteinase K hè diventata un impurtante materiale di prevenzione epidemica per a notte.
Difficultà in a pruduzzioni di proteinase K
Ancu s'ellu cù u sviluppu di l'epidemie, l'impurtante valore di proteinase K hè statu valutatu da e persone, hè vergognosu chì per via di l'excessive low-key di proteinase K, pocu cumpagnie domestiche anu participatu à a produzzione di proteinase K. Quandu a ghjente vulete stabilisce a pruduzione di proteinase K Durante u prucessu di produzzione, hè statu scupertu chì a proteinase K hè una proteina estremamente speciale.Hè estremamente sfida per espansione a capacità di produzzione di proteinase K in un cortu periodu di tempu.
A pruduzzione à grande scala di proteinasi K face e seguenti difficultà
1. Spressione bassa
A proteinasi K pò degradà in modu micca specificu a maiò parte di e proteine è pruvucà una tossicità seria à a cellula d'ospiti d'espressione.Dunque, u livellu di espressione di proteinasi K hè generalmente assai bassu.U screening di sistemi d'espressione è ceppi chì esprimenu assai proteinasi K generalmente richiede un ciculu più longu.
2. Residues di pigmenti è acidi nucleici
A fermentazione à grande scala introduce una grande quantità di pigmentu è residui di l'acidu nucleicu ospitante.Hè difficiuli di sguassà queste impurità cù un prucessu di purificazione simplice, è a purificazione cumplessa aumenta u costu è reduce a tarifa di ricuperazione.
3. Instabilità
Proteinase K ùn hè micca abbastanza stabile, pò enzymolyze stessu, è hè difficiule di guardà stabile à 37 ° C per un bellu pezzu senza un agentu protettivu.
4. Facile à precipitate
Quandu si preparanu u polveru liofilatu di proteinasi K, per assicurà chì u cuntenutu solidu di proteinasi K in u polveru liofilatu hè grande, hè necessariu aghjunghje un agente protettivu liofilatu à una alta cuncentrazione, ma quandu u polveru liofilizatu hè grande. cuncintrazione di proteinase K righjunghji 20mg / mL è sopra, hè faciule L'agregazione forma un precipitatu, chì porta grandi difficultà à a congelazione di proteinase K cun un altu cuntenutu solidu.
5. Grande investimentu
A Proteinase K hà una forte attività di proteasi è pò idrolizà altre proteasi in u laboratoriu.Per quessa, a proteinase K richiede spazii di pruduzzione specializati, equipaghji è persunale per a ricerca è u sviluppu è a produzzione.
Soluzione di proteinasi K di XD BIOCHEM
XD BIOCHEM hà una piattaforma di espressione è purificazione di proteine matura, è hà una ricca sperienza in l'espressione è a purificazione di e proteine recombinanti è l'ottimisazione di i prucessi di produzzione.Per mezu di a furmazione rapida di una squadra di ricerca è sviluppu, u prucessu di pruduzzione à grande scala di proteinasi K hè stata superata.A pruduzzione mensile di polvere liofilizzata hè più di 30 KG.U pruduttu hà un rendimentu stabile, una alta attività specifica di l'enzima, è senza residui di citocromu è di acidi nucleici.Benvenuti à cuntattà XD BIOCHEM Ottene un pacchettu di prova (E-mail:sales@xdbiochem.comTel: +86 513 81163739).
E soluzioni tecniche di XD BIOCHEM includenu
Aduprendu l'integrazione di plasmidi multi-copia, i ceppi d'alta espressione cù un livellu di espressione di 8g / L sò scelti, chì supera u prublema di u nivellu d'espressione bassu di proteinasi K.
Per mezu di u stabilimentu di un prucessu di purificazione multi-passu, u citocromu di l'ospiti è i residui di l'acidu nucleicu di proteinasi K sò stati eliminati cù successu sottu u valore standard.
Per mezu di screening high-throughput di formulazioni di buffer protettivi, hè statu sceltu un buffer chì pò almacenà stabilmente a proteinasi K à 37 ° C.
I tamponi di screening superanu u prublema chì a proteinasi K hè faciule d'aggregate è di precipitate à alta concentrazione, è pone a basa per l'elevatu cuntenutu solidu di a proteinasi K a liofilizzazione.
XD BIOCHEM proteinasi K campione
Test di stabilità di XD BIOCHEM proteinase K: ùn ci sarà micca un cambiamentu significativu in l'attività dopu à 80 d à a temperatura di l'ambienti
Test di stabilità di XD BIOCHEM proteinase K: ùn ci sarà micca un cambiamentu significativu in l'attività dopu à 80 d à a temperatura di l'ambienti.
Comparazione di l'effettu di l'estrazione di l'acidu nucleicu di XD BIOCHEM proteinase K è i prudutti cuncurrenti.In u prucessu di l'estrazione di l'acidu nucleicu, XD BIOCHEM è a proteinase competitiva K sò aduprate rispettivamente.L'efficienza di estrazione di XD BIOCHEM proteinase K hè più altu è u valore Ct di u genu di destinazione hè più bassu.
Tempu di post: 31-dic-2021