Ci sò parechji eroi scunnisciuti intornu à noi, chì parenu esse ordinari, ma in realtà cuntribuiscenu in silenziu assai à noi. A proteinasi K hè l'"eroe scunnisciutu" in l'industria di a diagnostica moleculare, ancu s'è paragunata à i "grandi è putenti" in l'industria, a proteinasi K hè cusì discreta chì avemu trascuratu dapoi tantu tempu a so impurtanza. Cù u scoppiu di a nova epidemia di curona, a dumanda di proteinasi K hè cresciuta, è l'offerta in casa è à l'esteru hè assai daretu à u cunsumu, è tutti si sò subitu resi contu chì a proteinasi K hè cusì impurtante.
À chì serve a proteinasi K?
A proteinasi K hè una serina proteasi cù attività enzimatica proteolitica è pò mantene l'attività in una vasta gamma di ambienti (pH (4-12,5), buffer ad alta concentrazione di sale, alta temperatura di 70 ° C, ecc.). Inoltre, l'attività di a proteinasi K ùn hè micca inibita da SDS, urea, EDTA, cloridrato di guanidina, isotiocianato di guanidina, ecc., è una certa quantità di detergente pò ancu aumentà l'attività di a proteinasi K. In u trattamentu medicu (disinfezione da virus è microbi), alimentariu (tenerizzamentu di carne), pelle (ammorbidimentu di capelli), vinificazione (chiarificazione di l'alcol), preparazione di aminoacidi (piume degradate), estrazione di acidi nucleici, ibridazione in situ, ecc., a proteinasi K hà applicazioni. L'applicazione più cumunamente aduprata hè l'estrazione di acidi nucleici.
A proteinasi K pò enzimalizà tutti i tipi di proteine in u campione, cumprese quelle istoni chì sò strettamente legate à l'acidi nucleici, in modu chì l'acidi nucleici possinu esse liberati da u campione è liberati in l'estrattu, facilitendu u prossimu passu di estrazione è purificazione. In a rilevazione di l'acidu nucleicu virale, a proteinasi K hè unu di i cumpunenti impurtanti in a suluzione di campionamentu di virus. A proteinasi K pò rompe è inattivà a proteina di rivestimentu di u virus, chì hè più sicura durante a fase di trasportu è di rilevazione; in più, a proteinasi K pò ancu degradà a RNasi chì impedisce a degradazione di l'RNA virale è facilita a rilevazione di l'acidu nucleicu.
A fama di notte di a proteinasi K
Ch'ella sia in u campu di a ricerca scientifica o in u campu di l'IVD, l'estrazione di l'acidu nucleicu hè l'esperimentu u più basicu, dunque a proteinasi K hè sempre stata una esistenza assai impurtante. Tuttavia, in u passatu, a proteinasi K era assai menu cunnisciuta chè u so rolu. Una grande parte di questu era perchè a relazione trà l'offerta è a dumanda di proteinasi K era assai stabile. Poche persone penserianu chì l'offerta di proteinasi K saria un prublema.
Cù u scoppiu di a nova epidemia di curona, a dumanda di testi di l'acidu nucleicu hè cresciuta. À a fine di ghjugnu 2020, a Cina hà cumpletatu guasi 90 milioni di novi testi di curona, è questu numeru hè ancu più allarmante à scala mundiale. In l'esperimenti di estrazione di l'acidu nucleicu, a cuncentrazione di travagliu di proteinasi K hè di circa 50-200 μg/mL. In generale, ci vole circa 100 μg di proteinasi K per estrarre un campione di acidu nucleicu. In l'usu reale, per aumentà l'efficienza di l'estrazione di l'acidu nucleicu, spessu a Proteinasi K serà aduprata in una quantità aumentata. A rilevazione di l'acidu nucleicu di u novu coronavirus hà purtatu una grande quantità di dumanda di proteinasi K. L'equilibriu originale di dumanda è offerta di proteinasi K hè statu rapidamente rottu, è a proteinasi K hè diventata un materiale impurtante di prevenzione di l'epidemie da a notte à a mattina.
Difficultà in a pruduzzione di proteinasi K
Ancu s'è cù u sviluppu di l'epidemia, u valore impurtante di a proteinasi K hè statu apprezzatu da a ghjente, hè imbarazzante chì per via di l'eccessiva mancanza di proteinasi K, poche cumpagnie naziunali sò state implicate in a pruduzzione di proteinasi K. Quandu a ghjente vole stabilisce a pruduzzione di proteinasi K Durante u prucessu di pruduzzione, hè statu scupertu chì a proteinasi K hè una proteina estremamente speciale. Hè estremamente difficiule d'espansione a capacità di pruduzzione di proteinasi K in un cortu periodu di tempu.
A pruduzzione à grande scala di proteinasi K scontra e seguenti difficultà
1. Espressione bassa
A proteinasi K pò degradà in modu non specificu a maiò parte di e proteine è causà una seria tossicità à a cellula ospite d'espressione. Dunque, u livellu d'espressione di a proteinasi K hè generalmente assai bassu. U screening di i sistemi d'espressione è di i ceppi chì esprimenu assai a proteinasi K richiede generalmente un ciclu più longu.
2. Residui di pigmenti è acidi nucleichi
A fermentazione à grande scala introduce una grande quantità di pigmenti è residui d'acidu nucleicu ospitante. Hè difficiule di rimuovere queste impurità cù un prucessu di purificazione simplice, è a purificazione cumplessa aumenta u costu è riduce u tassu di ricuperazione.
3. Instabilità
A proteinasi K ùn hè micca abbastanza stabile, pò enzimalizà si stessa, è hè difficiule di cunservalla stabilmente à 37 ° C per un bellu pezzu senza un agente protettivu.
4. Facile à precipitazione
Quandu si prepara a polvere liofilizzata di proteinasi K, per assicurà chì u cuntenutu solidu di proteinasi K in a polvere liofilizzata sia grande, hè necessariu aghjunghje un agente protettivu liofilizatu à alta concentrazione, ma quandu a concentrazione di proteinasi K righjunghje 20 mg / mL è più, hè faciule chì l'aggregazione forma un precipitatu, chì porta grandi difficultà à a liofilizzazione di proteinasi K cù un altu cuntenutu solidu.
5. Grande investimentu
A proteinasi K hà una forte attività proteasica è pò idrolizà altre proteasi in u laburatoriu. Dunque, a proteinasi K richiede zone di pruduzzione spezializate, equipaggiamenti è persunale per a ricerca, u sviluppu è a pruduzzione.
Soluzione di proteinasi K di XD BIOCHEM
XD BIOCHEM hà una piattaforma matura d'espressione è di purificazione di proteine, è hà una ricca sperienza in l'espressione è a purificazione di proteine ricombinanti è l'ottimisazione di i prucessi di pruduzzione. Attraversu a rapida furmazione di una squadra di ricerca è sviluppu, u prucessu di pruduzzione à grande scala di proteinasi K hè statu superatu. A pruduzzione mensile di polvere liofilizzata hè più di 30 KG. U pruduttu hà prestazioni stabili, alta attività specifica di l'enzima, è senza residui di citocromu è acidu nucleicu ospitante. Benvenuti à cuntattà XD BIOCHEM Ottene un pacchettu di prova (E-mail:sales@xdbiochem.comTel.: +86 513 81163739).
E suluzioni tecniche di XD BIOCHEM includenu
Aduprendu l'integrazione di plasmidi multi-copia, sò selezziunati ceppi ad alta espressione cù un livellu d'espressione di 8g/L, ciò chì supera u prublema di u bassu livellu d'espressione di a proteinasi K.
Attraversu a creazione di un prucessu di purificazione in parechje tappe, i residui di citocromu è di acidu nucleicu di a proteinasi K sò stati eliminati cù successu sottu à u valore standard.
Attraversu un screening à altu rendimentu di formulazioni di buffer protettivi, hè statu sceltu un buffer chì pò almacenà stabilmente a proteinasi K à 37 ° C.
I buffer di screening superanu u prublema chì a proteinasi K hè faciule da aggregà è precipità à alte concentrazioni, è pone e basi per a liofilizazione à altu cuntenutu di solidi di a proteinasi K.
Campione di proteinasi K XD BIOCHEM
Test di stabilità di a proteinasi K XD BIOCHEM: ùn ci serà micca cambiamentu significativu in l'attività dopu à 80 ghjorni à temperatura ambiente
Test di stabilità di a proteinasi K XD BIOCHEM: ùn ci serà micca cambiamentu significativu in l'attività dopu à 80 ghjorni à temperatura ambiente.
Paragone di l'effettu di estrazione di l'acidu nucleicu di a proteinasi K XD BIOCHEM è di i prudutti cuncurrenti. In u prucessu di estrazione di l'acidu nucleicu, XD BIOCHEM è a proteinasi K cumpetitiva sò aduprate rispettivamente. L'efficienza di estrazione di a proteinasi K XD BIOCHEM hè più alta è u valore Ct di u genu bersagliu hè più bassu.
Data di publicazione: 31 dicembre 2021